氧化石墨烯促进HaCaT细胞迁移及初步机制研究

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单位陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室;四川大学高分子研究所高分子材料工程国家重点实验室;曼尼托巴大学和曼尼托巴儿童健康研究所机械工程生物化学和医学遗传学系;
来源第三军医大学学报
出版年2018
期号10
摘要
目的观察氧化石墨烯(grapheneoxide,GO)对人表皮细胞株HaCaT细胞迁移的影响,初步探讨其可能机制。方法将HaCaT细胞分别应用GO终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1.0、10.0μg/mL的RPMI1640细胞培养液培养,在培养的不同时相点,应用CCK-8法检测细胞活性,蛋白印迹法检测PCNA表达。采用划痕实验检测细胞迁移情况,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架改变,蛋白质印迹法检测细胞F-actin、Vinculin的表达。结果 (1)低浓度GO对HaCaT细胞增殖无影响,当GO浓度高于1.0μg/mL时则具有明显的毒性作用。10.0μg/mL GO可明显抑制细胞PCNA表达(P<0.05)。(2)划痕实验结果显示:低浓度GO可促进HaCaT细胞迁移,其中以0.01μg/mL浓度效果最明显,在划痕后24 h,该组细胞迁移面积比对照组增加35.33%(P<0.01)。(3)激光共聚焦显微镜观察发现,0.01μg/mL GO刺激后,细胞纤毛明显增多,胞内应力性纤维增粗。而其1.0μg/mL组细胞变小、变圆。(4)蛋白印迹法检测结果显示:0.01μg/mL GO刺激后F-actin表达增加(P<0.05),而1.0μg/mL作用后F-actin表达却明显低于对照组。GO能促进Vinculin表达,但仅当GO浓度高于0.1μg/mL后差异才有统计学意义。结论特定浓度的GO可促进HaCaT细胞迁移,可能与其影响细胞骨架及F-actin、Vinculin表达有关。

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