青霉素G酰化酶(penicillin G acylase,EC 3.5.1.11,简称PGA)是重要的医药工业用酶,广泛用于半合成β-内酰胺类抗生素的生产.粪产检杆菌(Alcaligenes faecalis)来源的PGA属于该家族较为独立的一个分支,相较于工业中常用的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)来源的PGA,其具有较高的热稳定性;较强的立体异构专一性;高底物亲和力等特点.本研究中将重组粪产碱杆菌来源的PGA通过共价结合在环氧型载体Eupergit C上,通过对酶浓度、固定化反应时间、pH以及反应温度等条件的考察,确定了最优固定化条件:375 mg比活力5000 U/g的重组粪产碱杆菌青霉素G酰化酶蛋白对应1g载体,最适pH 8.0,反应温度30℃。反应120小时后制得固定化青霉素G酰化酶活力达到220U/g湿载体。该固定化酶可在含饱和乙酸丁酯磷酸缓冲液中彻底水解青霉素G钾盐。经过15批连续水解反应,固定化酶仍保持95%的活力,展现出良好的稳定性。以上结果表明固定化技术提高了PGA的稳定性,并且实现酶的长期反复使用,提高了酶的使用效率。此外,EupergitC载体表面具有一定数量的羟基,使得固定化酶周围能保持一个亲水的微环境,从而降低了有机溶剂对酶的影响,提高了酶在混合体系中的活力。