目的:本实验鉴于中医藏象理论核心内容之一的“肾藏精生髓主骨”理论,基于“阴阳互济”选取中医经典补肾益精方剂左归丸和右归丸,通过细胞凋亡的角度观察左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞成骨、成脂分化的影响,揭示了左、右归丸防治绝经后骨质疏松症的机制,从而为中医药防治绝经后骨质疏松症提供一定实验依据。材料与方法:SPF级2月龄SD雌性未生育大鼠60只随机分为6组,分别是空白对照组(Control)、模型组(OVX)、假手术组(Sham)、左归丸组(ZGW)、右归丸组(YGW)和补佳乐组(BJL)。采用双侧去卵巢法建立绝经后骨质疏松症模型,术后7d灌胃饲养,按人与大鼠体表面积折算等效剂量比值计算灌胃量,每日定时灌胃1次,连续给药12周后,利用全骨髓贴壁法获取去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞,进行原代培养至P3代,采用流式细胞仪鉴定骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal mesenchumal cells,BMSCs),MTT(噻唑蓝)法检测BMSCs各组增殖,对BMSCs分别进行成骨和成脂诱导分化,成骨部分采用p NPP法和ELISA法检测各组细胞碱性磷酸酶活性,采用改良钙钴染色法观察细胞内ALP表达,采用茜素红染色法观察细胞内矿化结节的形成。分别采用RT-q PCR和Western blot法检测成骨相关指标I型胶原(Collagen I,COLI)和核心结合因子(Runt-related transcription factor 2,Runx2)基因及蛋白的表达。成脂部分采用油红O染色法观察细胞中脂滴的形成,采用RT-q PCR和Western blot法检测成脂相关指标过氧化物酶增殖物激活酶(Peroxisome proliferator-acticvated receptor,PPARγ)和脂蛋白酯酶(lipoprtein lipase,LPL)基因及蛋白的表达。模型组分别加入10-6mol·L-1、10-5 mol·L-1、5×10-5 mol·L-1地塞米松(Dexamethasone,Dex),分别作用24、48、72 h后通过流式细胞仪检测凋亡率。以10-6 mol·L-1 Dex诱导BMSCs 48 h,并用流式细胞仪检测各组的凋亡率,以及在成骨和成脂分化后各组BMSCs凋亡率。采用RT-q PCR和Western blot法检测凋亡相关指标半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和成骨、成脂相关指标Runx2、COLI、PPARγ、LPL基因及蛋白的表达。MTT法检测不同浓度毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞增殖情况,采用Annexin V/PI双染法检测Dex诱导h FOB1.19细胞凋亡率,并对不同浓度毛蕊花糖苷进行凋亡检测,采用Hoechest 33258法和TUENEL法检测不同浓度毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞凋亡,采用RT-q PCR检测Bcl-2和Bax的基因表达,用Western blot方法检测凋亡相关指标Caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白表达,采用ERK1/2信号阻滞剂方法,以PD98059(ERK1/2特异阻滞剂)干预h FOB1.19细胞,采用Western blot方法检测ERK、p-ERK和Bcl-2蛋白表达。结果:1左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs增殖的研究1.1 BMSCs的鉴定将提取的细胞原代培养至P3代,采用流式细胞仪鉴定3种细胞表面因子CD29、CD90、CD11b/c。其中CD29和CD90为阳性表达,阳性表达率为:99.9%、98.7%;CD11b/c为阴性表达,其阴性表达率为14.3%。结合观察细胞形态图和细胞流式鉴定结果共同确定本实验提取的细胞为BMSCs。1.2 BMSCs生长曲线和左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs增殖的影响1.2.1 BMSCs生长曲线结果表明:BMSCs生长曲线呈近S型,随着接种密度增加,光密度值增大。细胞接种后的前3d为潜伏期,4d时细胞开始进入对数期,7d时细胞生长达到高峰。1.2.2左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs增殖的影响结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组的细胞增殖率明显降低(P<0.05),在3个给药组中,左归丸组促进去卵巢大鼠BMSCs增殖能力最佳。2左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs成骨与成脂分化的研究2.1左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs ALP的影响2.1.1改良钙钴染色法结果表明:与空白组比较,假手术组无变化,模型组和3个给药组在镜下棕黄色颗粒皆减少,模型组棕黄色颗粒最少;与模型组比较,3个给药组在镜下观察到棕黄色的颗粒明显增多,可见ALP的表达皆增强。以上结果说明,左、右归丸均能增强去卵巢大鼠BMSCs成骨分化ALP的表达,且左归丸效果优于右归丸。2.1.2 p NPP法结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组ALP活性显著降低(P<0.05);与模型组比较,3个给药组ALP活性均升高(P<0.05);3个给药组中,左归丸组和补佳乐组能增强去卵巢大鼠BMSCs ALP活性,其中左归丸组的效果更佳。2.1.3 ELISA法结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组ALP含量显著降低(P<0.01),3个给药组的ALP含量皆增加(P<0.05);与模型组比较,3个给药组ALP含量皆显著增加(P<0.05);与补佳乐组比较,右归丸组显著降低(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组ALP含量显著降低(P<0.05);在3个给药组中左归丸组的ALP含量最高。2.2左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs矿化结节形成的影响结果表明:与空白组比较,假手术组无差异,模型组与右归丸组矿化结节明显减少;与模型组比较,3个给药组在镜下观察到棕红色矿化结节明显增多;与补佳乐组比较,右归丸组矿化结节形成减少;与左归丸组比较,右归丸组矿化结节形成减少;表明左归丸可以增强BMSCs成骨诱导后矿化结节的形成。2.3左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs COLI和Runx2 m RNA及蛋白表达的影响结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组COLI和Runx2的m RNA和蛋白表达水平皆降低(P<0.05);与模型组比较,左归丸组和补佳乐组BMSCs COLI和Runx2的m RNA和蛋白表达水平皆显著升高(P<0.05);与补佳乐组比较,左归丸组BMSCs的COLI和Runx2 m RNA和蛋白表达水平皆升高(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组BMSCs COLI和Runx2 m RNA和蛋白表达水平皆显著降低(P<0.05)。以上结果说明,左、右归丸通过提高成骨相关指标COLI和Runx2基因和蛋白表达促进去卵巢大鼠BMSCs成骨分化,且左归丸效果优于右归丸。2.4左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs脂滴形成的影响结果表明:与空白组比较,假手术组无差异,模型组和右归丸组脂滴数量增多;与模型组比较,观察到左归丸组和补佳乐组脂滴数量明显减少;与补佳乐组比较,右归丸组脂滴数量增多;与左归丸组比较,右归丸组数量明显增多;说明右归丸组可以增强去卵巢大鼠BMSCs成脂分化中脂肪细胞的形成。2.5左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs PPARγ和LPL m RNA及蛋白表达的影响2.5.1 PPARγm RNA及蛋白表达m RNA检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组、右归丸组和补佳乐组的BMSCs PPARγm RNA表达显著增强(P<0.01);与模型组比较,左归丸组和补佳乐组的BMSCs PPARγ的m RNA表达水平皆显著降低(P<0.05);与补佳乐组比较,左归丸组PPARγm RNA表达水平显著降低(P<0.01);与左归丸组比较,右归丸的BMSCs PPARγm RNA表达水平显著升高(P<0.01)。蛋白检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组、右归丸组和补佳乐组的BMSCs PPARγ蛋白表达显著增强(P<0.01);与模型组比较,左归丸组BMSCs成脂分化后PPARγ蛋白表达显著降低(P<0.01);与补佳乐组比较,左归丸组PPARγ蛋白表达显著降低(P<0.05),PPARγ在右归丸组中蛋白表达显著升高(P<0.01);与左归丸组比较,右归丸组的BMSCs PPARγ蛋白表达显著增强(P<0.01)。以上结果说明,左归丸组能降低去卵巢大鼠BMSCs成脂分化能力,右归丸组可以增强去卵巢大鼠BMSCs成脂分化能力。2.5.2 LPL m RNA及蛋白表达m RNA检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组显著升高(P<0.05);与模型组比较,3个给药组LPL m RNA表达皆下降(P<0.05);与补佳乐组比较,右归丸组LPL m RNA表达水平显著降低(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组LPL m RNA表达水平显著降低(P<0.05)。蛋白检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组显著升高(P<0.05);与模型组比较,3个给药组LPL蛋白表达水平皆下降(P<0.05),且右归丸组更明显;与补佳乐组比较,右归丸的LPL蛋白表达下调但无显著性差异(P>0.05);与左归丸组比较,右归丸组LPL蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。以上结果说明,右归丸组可通过降低LPL m RNA和蛋白的表达调节去卵巢大鼠BMSCs成脂分化后的相关脂代谢。3左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs成骨与成脂凋亡的研究3.1地塞米松对去卵巢大鼠BMSCs凋亡的研究结果表明:地塞米松可以诱导去卵巢大鼠BMSCs凋亡,地塞米松浓度10-5mol·L-1作用48 h为诱导凋亡最适条件。3.2左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs成骨凋亡的影响3.2.1左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs流式凋亡的影响结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05);模型组和右归丸组的BMSCs成骨后凋亡率显著升高(P<0.05);与模型组比较,3个给药组BMSCs成骨后凋亡率皆降低(P<0.05);与补佳乐组比较,左归丸组凋亡率显著降低(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组凋亡率显著升高(P<0.05)。以上结果说明,左、右归丸均可抑制去卵巢大鼠BMSCs成骨凋亡,左归丸效果更佳。3.2.2左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs Caspase-3 m RNA及蛋白表达的影响m RNA检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组的Caspase-3 m RNA表达水平显著升高(P<0.05),左、右归丸组BMSCs Caspase-3 m RNA表达水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,3个给药组BMSCs Caspase-3 m RNA表达水平显著降低(P<0.05);与补佳乐组比较,左归丸组Caspase-3 m RNA表达水平显著降低(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组BMSCs Caspase-3 m RNA表达水平显著升高(P<0.05)。蛋白检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组的Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),左、右归丸组的BMSCs Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,3个给药组的BMSCs Caspase-3蛋白表达皆显著降低(P<0.05);与补佳乐组比较,左归丸Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05)。以上结果说明,左、右归丸均可抑制去卵巢大鼠BMSCs成骨凋亡,左归丸效果更佳。3.2.3左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs Bcl-2 m RNA及蛋白表达的影响m RNA检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组和右归丸组的BMSCs Bcl-2 m RNA表达水平显著降低(P<0.01),左归丸组的BMSCs Bcl-2 m RNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,左归丸组和补佳乐组的BMSCs Bcl-2 m RNA表达水平显著升高(P<0.01);与补佳乐组比较,左归丸组Bcl-2 m RNA表达水平显著升高(P<0.01),右归丸组表达显著降低(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组BMSCs Bcl-2 m RNA表达水平显著降低(P<0.01)。蛋白检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组和3个给药组BMSCs的Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,3个给药组BMSCs Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与补佳乐组比较,右归丸组Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组的BMSCs Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05)。以上结果说明,左、右归丸均可抑制去卵巢大鼠BMSCs成骨凋亡,左归丸效果更佳。3.2.4左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs成骨后COLI和Runx2 m RNA及蛋白表达的影响m RNA检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组和左归丸组BMSCs的COLI和Runx2 m RNA表达有显著性差异(P<0.01);与模型组比较,3个给药组BMSCs的COLI和Runx2 m RNA表达显著升高(P<0.01);与补佳乐组比较,左归丸组COLI和Runx2 m RNA表达显著升高(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组BMSCs的COLI和Runx2 m RNA表达显著降低(P<0.05)。蛋白检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组BMSCs的COLI和Runx2蛋白表达水平降低而左归丸组的蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,3个给药组BMSCs的COLI和Runx2蛋白表达显著升高(P<0.05);与补佳乐组比较,左归丸组COLI和Runx2蛋白表达显著升高(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组BMSCs COLI和Runx2蛋白表达显著降低(P<0.05)。以上结果说明,左、右归丸均可抑制去卵巢大鼠BMSCs成骨凋亡,左归丸效果更佳。3.3左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs成脂凋亡的影响3.3.1左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs成脂分化后流式凋亡的影响结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组、左归丸和补佳乐组的BMSCs凋亡率显著升高(P<0.05);与模型组比较,3个给药组的BMSCs凋亡率降低,有显著性差异(P<0.05);与补佳乐组比较,右归丸凋亡率显著降低(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组凋亡率显著降低(P<0.05)。以上结果说明,右归丸可降低去卵巢大鼠BMSCs成脂凋亡。3.3.2左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs成脂分化后Caspase-3 m RNA及蛋白表达的影响m RNA检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组、左归丸组和补佳乐组Caspase-3 m RNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,3个给药组BMSCs成脂分化后Caspase-3 m RNA表达皆降低(P<0.05);与补佳乐组比较,右归丸组m RNA表达降低(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组Caspase-3 m RNA表达降低(P<0.05)。蛋白检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组和3个给药组Caspase-3蛋白表达水平皆显著升高(P<0.05);与模型组比较,3个给药组BMSCs成脂分化后Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与补佳乐组比较,右归丸组表达降低但无显著性差异;与左归丸组比较,右归丸组BMSCs的Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05)。以上结果说明,右归丸可降低去卵巢大鼠BMSCs成脂分化后凋亡。3.3.3左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs成脂分化后Bcl-2 m RNA及蛋白表达的影响m RNA检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组和左归丸组的Bcl-2 m RNA表达显著降低(P<0.05);右归丸组的Bcl-2 m RNA表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,3个给药组Bcl-2 m RNA表达显著升高(P<0.05);与补佳乐比较,右归丸组表达显著升高(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组表达显著升高(P<0.05)。蛋白检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组和3个给药组Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,3个给药组Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与补佳乐组比较,右归丸组表达显著升高(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组表达显著升高(P<0.05)。以上结果说明,右归丸可降低去卵巢大鼠BMSCs成脂分化后凋亡。3.3.4左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs PPARγm RNA及蛋白表达的影响m RNA检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组的BMSCs PPARγm RNA的表达显著升高(P<0.05),3个给药组BMSCs PPARγm RNA表达皆降低(P<0.05);与模型组比较,3个给药组BMSCs PPARγm RNA皆显著降低(P<0.01);与补佳乐组比较,右归丸组PPARγm RNA表达显著升高(P<0.01);与左归丸组比较,右归丸组BMSCs的PPARγm RNA表达显著升高(P<0.01)。蛋白检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组和左、右归丸组的PPARγ蛋白表达水平皆有显著性差异(P<0.05);与模型组比较,3个给药组PPARγ蛋白表达水平皆显著降低(P<0.05);与补佳乐组比较,右归丸组PPARγ蛋白显著升高(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组BMSCs PPARγ蛋白表达水平显著升高(P<0.01)以上结果说明,右归丸可降低去卵巢大鼠BMSCs成脂分化后凋亡。3.3.5左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs LPL m RNA及蛋白表达的影响m RNA检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组的LPL m RNA表达显著升高(P<0.01);右归丸组的LPL m RNA显著降低(P<0.05);与模型组比较,3个给药组的BMSCs LPL m RNA表达皆显著降低(P<0.01),与补佳乐组比较,右归丸组LPL m RNA表达显著下降(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组BMSCs的LPL m RNA表达显著降低(P<0.05)。蛋白检测结果表明:与空白组比较,假手术组无显著性差异(P>0.05),模型组和右归丸组的LPL蛋白表达水平有显著性差异(P<0.05);与模型组比较,3个给药组LPL蛋白表达水平皆显著降低(P<0.01);与补佳乐组比较,右归丸LPL蛋白表达显著降低(P<0.01);与左归丸组比较,右归丸组BMSCs LPL蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。以上结果说明,右归丸可降低去卵巢大鼠BMSCs成脂分化后凋亡。4.毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞凋亡的影响4.1毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞增殖的影响4.1.1 h FOB1.19生长曲线h FOB1.19生长曲线呈S型,随着接种浓度增加,光密度随之升高。细胞接种后3h为潜伏期,在12h细胞开始进入对数期,48h细胞生长达到高峰。4.1.2毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞的增殖结果表明:与空白组比较,随着毛蕊花糖苷浓度增加,对h FOB1.19细胞增殖能力降低。10-6M与10-5M毛蕊花糖苷增加h FOB1.19的增殖活性,其10-5M毛蕊花糖苷具有最大的促细胞增殖作用。4.2地塞米松诱导h FOB1.19细胞凋亡的最适条件结果表明:地塞米松可以诱导h FOB1.19细胞凋亡,地塞米松浓度为10-5mol·L-1作用48h时是最适凋亡条件。4.3毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞凋亡的影响4.3.1不同浓度毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞流式凋亡的影响结果表明:与空白组比较,2*10-4M和3*10-4M的凋亡率有显著性差异(P<0.05);随着毛蕊花糖苷浓度增加,凋亡率也逐渐增加。4.3.2不同浓度毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞Hoechst33258染色凋亡的影响结果表明:空白组的细胞染色质均匀分布,呈现出弥散的低密度蓝色荧光,不同浓度毛蕊花糖苷处理h FOB1.19细胞呈现不同程度的凋亡特征。2*10-4M和3*10-4M的毛蕊花糖苷明显的促进凋亡的发生;尤其是3*10-4M的毛蕊花糖苷颗粒状荧光明显较其他组明显增多;随着毛蕊花糖苷浓度增加,凋亡也逐渐增加。4.3.3不同浓度毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞TUENEL凋亡的影响结果表明:与空白组比较,随着毛蕊花糖苷浓度的增加,绿色荧光数量逐渐增加。2*10-4M和3*10-4M的毛蕊花糖苷明显的促进凋亡的发生。3*10-4M的毛蕊花糖苷绿色着色细胞数量明显较其他组明显增多。随着毛蕊花糖苷浓度增加,凋亡也逐渐增加。4.4毛蕊花糖苷干预h FOB1.19细胞凋亡机制的研究4.4.1毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞Bcl-2/Bax m RNA及蛋白的影响m RNA检测结果表明:与空白组比较,毛蕊花糖苷浓度2*10-4M、3*10-4M和Dex的h FOB1.19细胞Bcl-2/Bax的m RNA表达皆有显著性差异(P<0.05);与Dex比较,毛蕊花糖苷10-6M、10-5M、10-4M的h FOB1.19细胞Bcl-2/Bax的m RNA表达皆有显著性差异(P<0.05);与3*10-4M比较,毛蕊花糖苷10-6M、10-5M、10-4M的Bcl-2/Bax的m RNA表达有显著性差异(P<0.05)。蛋白检测结果表明:与空白组比较,毛蕊花糖苷浓度10-4M、2*10-4M、3*10-4M和Dex的h FOB1.19细胞Bcl-2/Bax的蛋白表达皆有显著性差异(P<0.05);与Dex比较,毛蕊花糖苷10-6M、10-5M、10-4M的h FOB1.19细胞Bcl-2/Bax的蛋白表达皆有显著性差异(P<0.05);与3*10-4M比较,毛蕊花糖苷10-6M、10-5M、10-4M的Bcl-2/Bax的蛋白表达有显著性差异(P<0.05)。4.4.2毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞Caspase-3的蛋白表达结果表明:与空白组比较,2*10-4M、3*10-4M和Dex的h FOB1.19细胞Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05);与Dex比较,10-6M、10-5M和10-4M的h FOB1.19细胞Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05);与3*10-4M比较,毛蕊花糖苷10-6M、10-5M、10-4M的h FOB1.19细胞Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05)。4.5毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞ERK1/2信号通路的影响4.5.1毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞ERK1/2蛋白磷酸化的影响结果表明:与空白组比较,3*10-4M和Dex显著增强h FOB1.19细胞的p-ERK蛋白表达(P<0.05);与Dex组比较,除3*10-4M组外各组h FOB1.19细胞的p-ERK蛋白表达显著降低(P<0.05);与3*10-4M比较,毛蕊花糖苷10-6M、10-5M、10-4M的h FOB1.19细胞p-ERK蛋白表达降低(P<0.05);另外,加入PD98059后,各组与未加PD98059比较,p-ERK表达明显下调(P<0.05)。4.5.2毛蕊花糖苷对h FOB1.19细胞ERK1/2信号通路Bcl-