目的建立旋转细胞培养系统(Rotary Cell Culture System,RCCS),探究动态力学刺激下血小板裂解液(Platelet lysate,PL)复合国产多孔钽对成骨细胞相关蛋白表达以及成骨细胞分化的影响。方法1大体和显微镜下观察多孔钽形态特征。2采用反复冻融法制备血小板裂解液,用PL修饰国产多孔钽,并观察细胞-多孔钽复合物生长状态。3 CCK-8法筛选PL最佳体积分数。4实验分组:MG63细胞组(A组),MG63细胞+多孔钽组(B组),MG63细胞+多孔钽+动态培养组(C组),MG63细胞+血小板裂解液+多孔钽组(D组),MG63细胞+血小板裂解液+多孔钽+动态培养组(E组)。5用ELISA法检测各组细胞成骨因子表达情况。6用Western blot法检测成骨因子表达情况。7检测各组细胞中碱性磷酸酶活性和钙离子含量。8检测动态组和静态组乳酸和葡萄糖含量。结果1多孔钽金属材料为圆片状金属,直径约为1.5cm,厚度约为0.2cm,外观为灰色,呈现金属光泽,表面呈凹凸不平状,可见很多细小颗粒,扫描电镜下观察可见细小颗粒构成的蜂窝状微孔结构,各个孔隙之间相互联通,孔径大小均匀一致,孔壁内也有微孔结构。经过PL修饰的多孔钽表面更加粗糙不平,孔隙中存在培养基沉积物,沉积物与多孔钽结合良好,分布均匀。2倒置相差显微镜观察可见细胞在多孔钽片中稳定生长,细胞状态良好,形态饱满,伸出伪足黏附在多孔钽周围,随着培养时间延长,细胞数量逐渐增多,在多孔钽孔隙中黏附融合并聚集成细胞团。扫描电镜下可见细胞和多孔钽金属紧密黏附,周围可见细胞基质分泌,细胞伸出伪足并交叠,部分细胞和伪足深入孔隙内。经过血小板裂解液修饰的多孔钽与细胞结合更紧密,细胞伪足伸展更充分,细胞外基质分泌更旺盛。荧光显微镜观察复合物鬼笔环肽染色,可见细胞微丝结构,荧光影像与多孔钽相互交错重叠,说明微丝结构和细胞核深入孔隙内部,说明细胞与多孔钽共生长,并深入孔隙内部。3培养1、2、3天,PL组细胞增殖数量多于空白组,差异具有统计学意义(P0.05),培养第7天,B组分泌表达量多于A组(P0.05),培养第7天,E组蛋白表达量均高于前4组,差异具有统计学意义(P2+含量结果表明:E组ALP活性和Ca²⁺含量均高于前4组,D组ALP活性和Ca²⁺含量高于B、C组,差异具有统计学意义(P0.01)。动态培养组和静态培养组3天、5天、7天葡萄糖含量分别随着时间增加而减少(P<0.05)。动态培养组3、5、7天葡萄糖含量显著多于同时间点静态培养组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论动态力学刺激下血小板裂解液复合国产多孔钽对成骨细胞COL-1、RUNX2、OPN因子有促表达作用,能够增加成骨细胞ALP活性和钙离子含量,刺激成骨相关因子表达和矿化并且能够改善细胞生长环境,提高葡萄糖利用率,减少乳酸堆积。图21幅;表14个;参131篇。