目的探究国产多孔钽联合骨形态发生蛋白-2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)在成骨诱导条件下向成骨细胞分化及相关成骨因子表达的影响。方法1取生长1月龄的SD大鼠BMSCs,培养至第3代分别向成骨细胞方向、成软骨细胞方向以及成脂肪细胞方向进行诱导,持续诱导14天后行茜素红、阿利新蓝、油红O染色进行鉴定;2 BMSCs与多孔钽复合后通过细胞计数检测其增殖;3成骨诱导14天后鬼笔环肽染色BMSCs-多孔钽复合物,检测其复合生长情况。4实验分组:A组(空白对照组):单纯BMSCs加完全成骨条件培养基培养;B组(多孔钽组):BMSCs接种钽支架材料后加完全成骨条件培养基培养;C组为(BMP-2组):BMSCs加含BMP-2的完全成骨条件培养基培养,D组(多孔钽-BMP-2组):BMSCs接种钽支架材料后加含BMP-2的完全成骨条件培养基培养。诱导培养7、14、21d后应用ELISA法、实时荧光定量PCR、Western-blot法检测BMSCs向成骨细胞分化后COL-Ⅰ、OCN、OPN mRNA和蛋白的表达情况。结果1提取培养的BMSCs,培养至第3代进行试验,BMSCs向成骨细胞方向持续诱导后,细胞形态发生改变,诱导3天后细胞排列具有一定方向性,呈漩涡状密集生长。2 BMSCs鉴定:BMSCs向成骨细胞方向诱导14天后,茜素红染色阳性;向软骨细胞方向诱导后,阿利新蓝染色阳性;向脂肪细胞方向诱导后,油红O染色阳性。3 CCK-8法检测多孔钽组细胞与空白对照组细胞增殖相比,差异无统计学意义(P>0.05),随着时间的延长组在各自不同时间点上相比,差异有统计学意义(P<0.05),证实多孔钽对BMSCs生长无影响。4荧光显微镜观察鬼笔环肽染色国产多孔钽-BMSCs复合物结果显示BMSCs附着在多孔钽表面,并向内部生长,同时分泌出许多细胞产物。5 ELISA法检测结果:在成骨细胞诱导初期多孔钽-BMP-2组、BMP-2组OCN、OPN、COL-Ⅰ表达高于空白对照组、多孔钽组(P<0.05);而空白对照组与多孔钽组表达相比,多孔钽-BMP-2组与BMP-2组表达相比,差异均无统计学意义(P>0.05),随着诱导时间的延长,在诱导后期,多孔钽组、BMP-2组、多孔钽-BMP-2组OCN、OPN表达高于空白对照组(P<0.05);BMP-2组、多孔钽-BMP-2组COL-Ⅰ表达高于多孔钽组、空白对照组(P<0.05),而多孔钽组与空白对照组组COL-Ⅰ表达相比,BMP-2组与多孔钽-BMP-2组COL-Ⅰ表达相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。6 qPCR法检测结果:在成骨细胞诱导初期多孔钽-BMP-2组、BMP-2组OCN、OPN、COL-ⅠmRNA的表达高于空白对照组、多孔钽组(P<0.05);而OCN、OPN、COL-ⅠmRNA在空白对照组的表达与多孔钽组相比,在多孔钽-BMP-2组的表达与BMP-2组相比,差异均无统计学意义(P>0.05),在诱导后期,多孔钽组、BMP-2组、多孔钽-BMP-2组OCN、OPN mRNA的表达高于空白对照组(P<0.05);BMP-2组、多孔钽-BMP-2组COL-ⅠmRNA的表达高于多孔钽组、空白对照组(P<0.05),而COL-ⅠmRNA在多孔钽组的表达与空白对照组相比,在BMP-2组的表达与多孔钽-BMP-2组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。7 Westernblot法检测结果:在成骨细胞诱导初期多孔钽-BMP-2组、BMP-2组OCN、OPN、COL-Ⅰ蛋白的表达高于空白对照组、多孔钽组(P<0.05);而OCN、OPN、COL-Ⅰ蛋白在空白对照组的表达与多孔钽组相比,在多孔钽-BMP-2组的表达与BMP-2组相比,差异均无统计学意义(P>0.05),在诱导后期,多孔钽组、BMP-2组、多孔钽-BMP-2组OCN、OPN蛋白的表达高于空白对照组(P<0.05);BMP-2组、多孔钽-BMP-2组COL-Ⅰ蛋白的表达高于多孔钽组、空白对照组(P<0.05),而COL-Ⅰ蛋白在多孔钽组的表达与空白对照组相比,在BMP-2组的表达与多孔钽-BMP-2组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论国产多孔钽支架材料联合BMP-2能增加BMSCs向成骨细胞增殖分化的能力,同时促进BMSCs向成骨细胞分化过程成骨因子COL-Ⅰ、OCN、OPN基因及蛋白水平的高表达,实现成骨细胞的快速矿化,骨组织与支架材料的稳固连接。图16幅;表16个;参69篇。