除了浓度外,时间也是影响污染物对生物毒性作用的重要因素。 为了考察持续暴露下青霉素类抗生素对大肠杆菌(Escherichia coli, E. coli)的联合抑菌作用,以哌拉西林钠(piperacillin sodium, PIP)、青霉素G 钾(penicillin G potassium, PEN)和青霉素V 钾盐(penicillin V potassium salt, PHE)为研究对象,以96 孔微板为实验载体,通过调整培养基成分比例、培养条件、测试时间、毒性指标计算以及微板设计等进行优化,建立了基于E. coli 的时间毒性微板分析法(time-dependent microplate toxicity analysis, t-MTA),系统考察了3 种抗生素以及均匀设计射线法设计的三元混合物体系(PIP-PEN-PHE)对E. coli 在不同暴露时间0.25、2、4、8 和12 h 的抑菌作用,运用浓度加和(concentration addition, CA)模型分析了抗生素联合抑菌作用类型。 结果表明,建立的t-MTA 可以测定3 种青霉素类抗生素及其混合物对E. coli 在不同暴露时间、不同暴露浓度的抑菌作用数据,且3 种抗生素及其三元混合物对E. coli 的抑菌作用均具有明显的时间依赖性,浓度-效应曲线均为“S”型;以半数效应浓度的负对数(pEC₅₀)为毒性大小指标,在暴露8 ~12 h 时,3 种抗生素对E. coli 抑菌活性为PIP(pEC₅₀=4.46 ~5.21)>PEN(pEC₅₀=4.16 ~4.39)>PHE(pEC₅₀=4.01 ~4.39),三元混合体系的5 条射线对E. coli 的抑菌作用为R4>R5>R3>R2>R1,且与混合物组分中的PIP 浓度比正相关(R=0.9189, RMSE=0.0703),即混合物毒性具有时间和组分浓度比依赖抑菌性;3 种抗生素及其三元混合物对E.coli 的抑菌作用,在同一暴露时间与药物的浓度呈正相关,暴露浓度相同时,与暴露时间呈正相关;依据CA 模型,三元混合体系整体表现为典型的加和作用。